前言

骨腫瘤(bone tumor)是發(fā)生于骨骼或其附屬組織（血管、神經(jīng)、骨髓等）的腫瘤，一般原發(fā)于股骨末端、脛骨和肱骨周圍，在青春期長骨快速生長后被診斷出來，但其確切病因不明。由于惡性骨腫瘤發(fā)展迅速愈后不佳死亡率高，故研究較為廣泛。骨腫瘤動(dòng)物模型可分為移植性模型和基因修飾模型。其中，可移植腫瘤模型通常又分為同種異體移植和異種動(dòng)物移植，移植腫瘤可以是腫瘤組織塊，也可以是細(xì)胞株。

部分造模方法

使用動(dòng)物：大鼠、家兔

【造模機(jī)制】：

同種異體移植是在同種或同系動(dòng)物身上移植，機(jī)體間即供體和受體間的共性大，容易在機(jī)體內(nèi)停留，生長繁殖，再現(xiàn)其腫瘤過程。通常選用小于6周的Sprague Dawley大鼠（此階段大鼠免疫功能尚未完善），選用大鼠骨肉瘤細(xì)胞株UMR106進(jìn)行同種異體骨內(nèi)原位移植，該細(xì)胞株是 20世紀(jì)70年代Sprague         Dawley大鼠經(jīng)放射性磷誘導(dǎo)獲得的一種成骨肉瘤細(xì)胞株，近來已被用于構(gòu)建骨肉瘤的原位移植模型，其成瘤率高，肺轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)，是肺轉(zhuǎn)移研究的理想細(xì)胞株。腫瘤細(xì)胞在缺乏有效的免疫監(jiān)視條件下發(fā)生逃逸生長，可獲得較高的成功率。目前可供選擇使用的細(xì)胞系或細(xì)胞株較多，許多細(xì)胞系在世界范圍分布廣泛，并且這些細(xì)胞的生物學(xué)特性已經(jīng)比較明確，一般都有明確的背景資料，使一群動(dòng)物同時(shí)接種同樣量的瘤細(xì)胞，生長速度一致，個(gè)體差異較小，成活率高，易于對(duì)照觀察這些都是便于科研成果相互比較和交流的有利因素。

【造模方法】：

1.大鼠 體外培養(yǎng)大鼠骨肉瘤細(xì)胞系UMR-106，獲得對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞備用。選取30~40日齡的Wistar大鼠，雌雄各半，鹽酸氯胺酮注射液肌內(nèi)注射麻醉(0.1g/kg)，碘酒消毒下肢，在脛骨上部干骺端內(nèi)側(cè)或股骨下端外側(cè)作切口，分離皮下組織暴露骨面后，用直徑1mm克氏針輕柔鉆入骨髓腔，有明顯的落空感，然后用12號(hào)輸血針頭沿此空斜鉆入髓腔，挖取其中骨髓和骨松質(zhì)，形成一傾斜通道，用無血清RPMT1640培養(yǎng)液將備用的骨肉瘤細(xì)胞稀釋成5×10⁶/ml，每個(gè)骨髓腔內(nèi)注射0.2ml，骨蠟封口，依次縫合肌膜、皮膚，消毒切口后包扎，飼養(yǎng)觀察，4周即可造模成功。

2.家兔 選用VX2細(xì)胞株作為研究對(duì)象，先在兔后肢肌肉內(nèi)注射細(xì)胞懸液，制備荷瘤兔，3周腫瘤生長至直徑約5cm的腫塊時(shí)，取新鮮的魚肉樣腫瘤組織剪碎，放入200~400目的細(xì)胞篩內(nèi)，擠壓過濾，并用Hanks液沖洗。收集細(xì)胞懸液，以1500r/min離心3分鐘，形成的沉淀小球再次懸浮于Hanks液中，制成1 ×10⁶/ml的腫瘤細(xì)胞懸液后，無菌條件下麻醉實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，于右膝關(guān)節(jié)髕骨下方縱行切開皮膚長約1cm，觸及脛骨平臺(tái)，18G的骨穿針經(jīng)脛骨近端關(guān)節(jié)面穿刺，穿刺針與脛骨骨干平行，轉(zhuǎn)動(dòng)穿刺針，當(dāng)產(chǎn)生落空感時(shí)，穿刺針頭即進(jìn)入骨髓腔內(nèi)，將穿刺針?biāo)腿?.0~2.5cm，針尖位于脛骨骨髓腔中上段，注入0.3ml腫瘤細(xì)胞懸液，拔針，縫合皮膚。

【模型特點(diǎn)】：

大鼠接種瘤細(xì)胞，植入骨內(nèi)后3周，骺端出現(xiàn)膨大，瘤區(qū)皮下可見豐富的迂曲小血管；切面可見皮內(nèi)質(zhì)破壞斷裂，腫瘤侵及軟組織，腔內(nèi)外的腫瘤組織呈魚肉狀；移植后四周，骺端球形膨大，腫塊直徑可達(dá)2~3cm大小，質(zhì)中或稍硬，骨皮質(zhì)破壞更明顯，肺門及邊緣有少量轉(zhuǎn)移灶，大小不等；移植后6周，腫瘤呈巨球形，質(zhì)稍硬；切面際骨皮質(zhì)已消失，僅見骨干殘端；雙肺見大量轉(zhuǎn)移瘤，大小不等，部分瘤灶融合，灰白色；移植后7周，右下肢腫瘤直徑可達(dá)3~5cm，雙肺廣泛轉(zhuǎn)移灶，瘤灶融合，正常肺組織結(jié)構(gòu)基本消失。模型鼠自然生存期為7周左右。

【模型評(píng)估和應(yīng)用】：

大鼠模型成功率較裸鼠荷瘤模型略低，但如果將接種后出現(xiàn)生長和轉(zhuǎn)移的瘤體組織勻漿后再接種，成功率將提高。雖然同種動(dòng)物間排斥作用相對(duì)較弱，但是不同環(huán)境的個(gè)體，生理狀態(tài)差異很大，因而適當(dāng)降低其免疫力或改變接種方式，也能達(dá)到增加成瘤的效果。該模型試驗(yàn)周期短，動(dòng)物成本低，便于飼養(yǎng)管理，故被廣泛應(yīng)用。兔模型通過經(jīng)脛骨近端關(guān)節(jié)面穿刺將腫瘤種植在脛骨中上段的骨髓腔內(nèi)，可將骨膜受到的機(jī)械性損傷減小到最小，且穿刺孔距離腫瘤種植部位相對(duì)較遠(yuǎn)，腫瘤不易通過該孔向外生長。

參考文獻(xiàn)：

1.張小玲，孟悛非，張朝暉．改良法兔VX2骨腫瘤模型的病理學(xué)與影像學(xué)觀．中國骨腫瘤骨病，2007,6(2): 89-92

2.施新猷，顧為望．人類疾病動(dòng)物模型．北京：人民衛(wèi)生出版社，2008

3.管明強(qiáng)，史占軍，李鵬．骨肉瘤荷瘤裸鼠模型兩種不同制作方法的比較．南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2008,28(11): 1960-1963

4.Bradgon CR,Jasty M,Muratoglu OK,et al. Third-body wear testing of a highly cross-linked acetahular liner. J Arthroplasty,2005,20 (3):379-385

5.Entz-Werl N,Choquet P,Neuville A,et al. Targeted ape; twist double-mutant mice: a new model of spontaneous osteosarcoma that mimics the human disease. Transl Oncol, 2010, 3 (6):344-353

6.Garvin K,Feschuk C. Polylactide-polyglycolide antibiotic implants. Clin Ort.bop Relat Res, 2005, 437:105-110

7.Jane LF,Peler SM,Monique LH. The expression of the urokmnase plasminogen activator  system in metaslatic murine osteosarcoma:an in vivo mouse model. Clin Cancer Res,2001, 7 (6):1654-1660

8.Walkley CR,Qudsi R,Sankaran VG,et al. Conditional mouse osteosarcoma, dependent on p53 loss and potentiated by loss of Rb, mimics the human disease. Genes Dev, 2008, 22 (12):1662-1676